Polimorfismos en los genes de dihidrofolato-reductasa ( dhfr ) y dihidropteroato-sintasa ( dhps ) y modelado estructural del gen dhps en aislamientos colombianos de Toxoplasma gondii / Gene polymorphisms in the dihydrofolate reductase ( dhfr ) and dihydropteroate synthase ( dhps ) genes and structural modelling of the dhps gene in Colombian isolates of Toxoplasma gondii

Introducción. No existen reportes sobre las variaciones en la secuencia de los genes blanco de los medicamentos anti- Toxoplasma en aislamientos provenientes de Suramérica. Objetivo. Clonar y secuenciar los genes de la dihidrofolato-reductasa ( dhfr ) y la dihidropteroato-sintetasa ( dhps ) de la cepa de referencia RH y de dos aislamientos colombianos de Toxoplasma gondii. Materiales y métodos. Se obtuvieron dos aislamientos de T. gondii en líquido céfalorraquídeo de pacientes colombianos positivos para HIV con toxoplasmosis cerebral. Se extrajo el ADN de los genes dhfr y dhps y se amplificaron mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los productos fueron clonados en el vector pGEM-T y secuenciados. Resultados. Se encontró un cambio de adenina por guanina (A « G) en la posición 235 del exón 2 del gen dhps , dos cambios de guanina por citocina (G « C) en las posiciones 259 y 260 y un cambio de timina por guanina (T « G) en la posición 371 del exón 4 del gen dhps. Por análisis bioinformático, en este último exón se identificó un polimorfismo no sinónimo en la región codificante, que podría llevar al cambio de una Glu (CAA o CAG) por una His (codificada por los codones AAU o AAC). Se calculó el modelo estructural de la enzima dihidropteroato-sintetasa (DHPS) de T. gondii y se identificaron las modificaciones en la estructura secundaria ocasionadas por las mutaciones. Conclusiones. La metodología estandarizada puede servir como base para la búsqueda de polimorfismos en muestras de pacientes con diferentes manifestaciones clínicas de toxoplasmosis y para establecer su posible relación con los cambios en la sensibilidad a los antifolatos y la reacción al tratamiento.

Introduction: There are no reports describing polymorphisms in target genes of anti- Toxoplasma drugs in South American isolates. Objective: This study sought to perform cloning and sequencing of the dihydrofolate reductase ( dhfr ) and dihydropteroate-synthase ( dhps ) genes of the reference Rh strain and two Colombian isolates of Toxoplasma gondii . Materials and methods: Two isolates were obtained from the cerebrospinal fluid of HIV-infected patients with cerebral toxoplasmosis. A DNA extraction technique and PCR assay for the dhfr and dhps genes were standardized, and the products of amplification were cloned into Escherichia coli and sequenced. Results: One polymorphism (A « G) was found at position 235 of exon 2 in the dhps gene. In addition, two polymorphisms (G « C) at positions 259 and 260 and one polymorphism (T « G) at position 371 within exon 4 of the dhps gene were detected. In this last exon, a bioinformatic analysis revealed a non-synonymous polymorphism in the coding region that could lead to the substitution of Glu (CAA or CAG) for His (encoded by codons AAU or AAC). A structural model of the T. gondii DHPS protein was calculated, and the results revealed modifications in secondary structure due to mutations. Conclusions: The methods described in this study can be used as a tool to search for polymorphisms in samples from patients with different clinical manifestations of toxoplasmosis and to examine their relationship with the therapeutic response.

Genotipos de Giardia duodenalis en muestras de niños de las guarderías del Instituto Colombiano de Bienestar Familiar y de perros en Ibagué, Colombia / Giardia duodenalis genotypes found in the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar day care centers and dogs in Ibagué, Colombia

Introducción. Se han descrito ocho genotipos de Giardia duodenalis, del A al H. Los genotipos A y B se han aislado de humanos y de una gran variedad de mamíferos; sin embargo, los genotipos del C al H han mostrado mayor especificidad de huésped. Objetivo. Identificar los genotipos de G. duodenalis a partir de quistes obtenidos en heces de niños de las guarderías del Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF) y de perros en Ibagué, mediante PCR-RFLP de los genes de la beta giardina y la glutamato deshidrogenasa. Materiales y métodos. Los quistes de las muestras positivas para G. duodenalis fueron sometidos a concentración; se extrajo su ADN y se efectuó el análisis de PCR-RFLP de los genes de la beta giardina y de la glutamato deshidrogenasa. Como control positivo se utilizó la cepa MHOM/CO/04/G40 procedente del Grupo de Parasitología del Instituto Nacional de Salud. Resultados. De las muestras tomadas de niños, 11/23 (48 %) correspondieron al genotipo A y, 12/23 (52 %), al genotipo B. Cuatro muestras de perros presentaron los genotipos C y D, específicos de este huésped. Conclusiones. En los niños solamente se encontraron los genotipos asociados a infecciones humanas (AII, BIII y BIV) y en los perros, los genotipos específicos para este huésped (C y D). Debido al reducido tamaño de las muestras analizadas provenientes de perros, y dado que estos no estuvieron en contacto con los niños de las guarderías del ICBF, no fue posible determinar una interacción entre el ciclo de transmisión de los humanos y el de los animales.

Introduction: Eight Giardia duodenalis genotypes (A-H) have been described to date. Genotypes A and B have been isolated from humans and a wide range of mammals; however, genotypes C-H have shown greater host specificity. Objective: Identifying G. duodenalis genotypes from cysts in faeces obtained from children attending the Instituto Colombiano de Bienestar Familiar (ICBF) day care centres and from dogs in Ibagué by PCR-RFLP targeting both the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes. Materials and methods: Cysts from G. duodenalis positive samples were concentrated, DNA was extracted and the b -giardin and glutamate dehydrogenase genes were analysed by PCR-RFLP. The MHOM/CO/04/G40 strain was used as positive control (this was obtained from the Grupo de Parasitología at the Instituto Nacional de Salud ). Results: Of the total human samples, 11/23 (48%) were genotyped as A and 12/23 (52%) as B; PCR-RFLP revealed that four canine samples were genotypes C and D, these being host-specific. Conclusions: Only genotypes associated with human infection (AII, BIII and BIV) were found in the children and host-specific genotypes were observed in canines (C and D). No interaction could be established between animal and human transmission cycles due to the small canine sample size and as the former did not come into contact with children attending ICBF day-care centres.

Aislamiento de Toxoplasma gondii a partir de líquido cefalorraquídeo de dos pacientes VIH positivos / Isolation of Toxoplasma gondii from cerebrospinal fluid of two human immunodeficiency virus-seropositive patients

Introducción: El aislamiento de T. gondii a partir de líquido cefalorraquídeo permite el diagnóstico confirmatorio de toxoplasmosis cerebral, considerada la segunda infección oportunista más importante en pacientes VIH positivos. Objetivo: Aislar Toxoplasma gondii a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral. Materiales y métodos: Se realizó la inoculación intraperitoneal del sedimento de LCR de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral en ratones ICR, se llevaron a cabo 5 pases sucesivos ciegos hasta la observación de taquizoítos de T. gondii en el exudado peritoneal mediante examen directo y coloración de extendidos con Romanowsky modificado. Resultados: A los 43 días los 4 ratones de trabajo presentaron piloerección, hepato-esplenomegalia, letargia y en el exudado peritoneal se observaron taquizoítos de T. gondii , hallazgo que fue confirmado al examinar los extendidos coloreados con Romanowsky modificado. Estos aislamientos fueron crioconservados y fue confirmada la viabilidad poscongelamiento de los mismos. Conclusiones: A pesar de que las técnicas de detección directa de T. gondii en LCR tienen una baja sensibilidad (38%) el presente trabajo permitió obtener dos aislamientos de T. gondii de dos pacientes VIH positivos con toxoplasmosis cerebral.

Background: Isolation of T. gondii from cerebrospinal fluid enables confirmatory diagnosis of cerebral toxoplasmosis, considered the second most important opportunistic infection in HIV-positive patients. Objective: To isolate Toxoplasma gondii from samples of cerebrospinal fluid from 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis. Materials and methods: Imprinting control region (ICR) mice were intraperitoneally inoculated with CSF sediment from 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis. Five of the inoculations were performed blind to successive passes. T. gondii tachyzoites were observed in these 5 inoculations in the peritoneal exudate through direct examination of the modified-Romanowsky-stained smears. Results: After 43 days, 4 mice showed piloerection, hepatosplenomegaly and lethargy. The peritoneal exudate exhibited T. gondii tachyzoites, a finding that was confirmed by examining the modified-Romanowsky-stained smears. These isolates were cryopreserved and their viability was confirmed after freezing. Conclusions: Although direct detection techniques of T. gondii in CSF have low sensitivity (38%), this study was able to yield 2 T. gondii isolates in 2 HIV-positive patients with cerebral toxoplasmosis.

Impacto de la ivermectina sobre las geohelmintiasis en el foco de oncocercosis en Colombia / The effect of ivermectin on geohelminth frequency (i.e. as used in the onchocerciasis control program in Colombia)

Objetivo: Evaluar el efecto de la ivermectina sobre la frecuencia de infección por geohelmintos en una población colombiana incluida en el Programa para la Eliminación de la Oncocercosis en las Américas. Métodos: Estudio de evaluación de impacto con enfoque longitudinal como punto referente inicial, la población de Naicioná (1996) y como control, sujetos de la misma población (2008). Para el enfoque transversal se usó como referente la población de Naicioná en 2008 y como control, sujetos de Dos Quebradas en 2008. El procesamiento de las muestras de materia fecal se hizo por Ritchie-Frick modificado. Resultados: Ascaris lumbricoides fue el parásito más frecuente 49,6 % (60/121; IC 95 %:37,8-63,8) en Naicioná y 47,4 % (36/76; IC 95 %: 33,2-65,6) en Dos Quebradas. El mayor efecto de la ivermectina en mayores de 5 años fue la disminución del riesgo de infección, para Trichiuris trichiura, de 86 % (IC95 %:74-93) en la evaluación longitudinal y 63 % (IC 95 %:24-82) en la evaluación transversal. La disminución en la frecuencia de Strongyloides stercoralis fue 93 % (IC 95 %: 45-99), en la evaluación longitudinal y 85 % (IC95 %:-031 - 99) en la evaluación transversal. Conclusiones: El uso de la ivermectina en el contexto del Programa para la Eliminación de la Oncocercosis en las Américas no es suficiente para el control de la morbilidad de todas las geohelmintiasis, se requiere de programas integrales que incluyan los componentes de educación y saneamiento básico.

Objective: Evaluating the effect of ivermectin on soil-transmitted helminthes (STH) infection frequency in a Colombian population included in the Onchocerciasis Elimination Program for the Americas (OEPA). Methods: This was an impact evaluation study which adopted a longitudinal approach using the population of Naicioná (1996) as baseline for comparison to people from the same population as controls (2008). The cross-sectional approach involved comparing the reference population of Naicioná (2008) to the population of Dos Quebradas (2008) used as controls. Fecal samples were processed by a modified Ritchie-Frick method. Results: Ascaris lumbricoides was the most frequently found parasite in Naicioná (60/121; 49.6 %: 37.8-63.895%CI) and in Dos Quebradas (36/76; 47.4 %: 33.2-65.6 95 % CI). Ivermectin’s main effect on the population aged over 5 years was a decreased risk of Trichiuris trichiura infection in both longitudinal assessment (86 % reduction: 74-93 95 % CI) and cross-sectional assessment (63 %:24-82 95 % CI). A 93 % reduction (45-99 95 % CI) in Strongyloides stercoralis frequency was found in longitudinal assessment, compared to 85 % in cross-sectional assessment (-031-99 95 % CI). Conclusions: Ivermectin use in the OEPA is not sufficient for STH morbidity control. Integrated programs including education and basic sanitation are required.

Correlación entre la incidencia de malaria y la prevalencia de las geohelmintiasis en Colombia: enfoque ecológico / Correlation between malaria incidence and prevalence of soil-transmitted helminths in Colombia: An ecologic evaluation

Introducción. Los estudios recientes han sugerido una asociación entre las geohelmintiasis y la incidencia de malaria, sin embargo, la evidencia publicada es escasa y divergente. Desde 1977 no se han realizado nuevos estudios ecológicos para explorar esta asociación. Los estudios ecológicos podrían explorar dicha correlación en la población, midiendo su impacto potencial en salud pública. Objetivo. Explorar la asociación entre la prevalencia de geohelmintiasis y la incidencia de malaria desde el punto de vista ecológico, en Colombia. Materiales y métodos. Usando datos provenientes de la Encuesta Nacional de Salud, llevada a cabo en 1980, se estimaron coeficientes de correlación de Spearman a nivel departamental, entre las prevalencias de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Uncinaria sp. con la incidencia de malaria para el mismo año suministrada por el Servicio de Erradicación de Malaria. A todos los datos, se les aplicó un método sólido de regresión con mínimos cuadrados ajustados.Resultados. La incidencia de malaria por Plasmodium falciparum y la prevalencia de A. lumbricoides tuvieron una correlación baja (R2=0,086). No obstante, dicha correlación se hizo más fuerte cuando se incluyó solamente el grupo de poblaciones con prevalencias de A. lumbricoides mayores de 30% (R2=0,916). Conclusión. Este trabajo evidenció una correlación ecológica en Colombia entre la incidencia de malaria y la prevalencia de geohelmintiasis. Esto podría justificar la existencia de una asociación entre estos dos grupos de parásitos o explicarse por la presencia de factores determinantes estructurales comunes a ambas enfermedades.

Introduction. Recent studies have suggested an association between the soil-transmitted helminth infections and malaria incidence. However, published evidence is still insufficient and diverging. Since 1977, new ecologic studies have not been carried out to explore this association. Ecologic studies could explore this correlation on a population level, assessing its potential importance on public health.Objectives. The aim of this evaluation is to explore the association between soil-transmitted helminths prevalence and malaria incidence, at an ecologic level in Colombia. Materials and methods. Using data from the National Health Survey, which was carried out in 1980 in Colombia, we calculated Spearman correlation coefficients between the prevalence of: Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura and hookworm, with the 1980 malaria incidence data of the same year provided from the Colombian Malaria National Eradication Service. A robust regression analysis with least trimmed squares was performed.Results. Falciparum malaria incidence and Ascaris lumbricoides prevalence had a low correlation (R2= 0.086) but this correlation was stronger into the clusters of towns with prevalence of Ascaris lumbricoides infection above 30% were only included (R2= 0.916). Conclusion. This work showed an ecologic correlation in Colombia between malaria incidence and soil-transmitted helminths prevalence. This could suggest that either there is an association between these two groups of parasites, or could be explained by the presence of common structural determinants for both diseases.

Obtención, purificación y caracterización de anticuerpos policlonales IgY desarrollados en gallina, dirigidos contra aislamientos colombianos de Giardia duodenalis / Obtention, purification and characterization of IgY polyclonal antibodies, developed in hens,

Introducción. El desarrollo de anticuerpos policlonales requiere de animales de laboratorio, generalmente, el conejo, que deben sangrarse para su obtención. Como alternativa, se han utilizado las gallinas. Objetivo. Desarrollar anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia duodenalis y evaluar diferentes métodos para su purificación a partir de yema de huevo. Materiales y métodos. Se inmunizaron tres gallinas intramuscularmente con trofozoítos del parásito: las inmunizaciones se realizaron a los 0, 15, 30, 45, 60, 90 y 120 días. Se recolectaron huevos en cada etapa de la inmunización y se purificó la IgY por deslipidación (D) y precipitación(P) mediante cinco protocolos diferentes: M1: (P: sulfato de amonio/D: dextrán sulfato-cloruro de calcio), M2: (D: dextrán sulfato-cloruro de calcio/P: sulfato de amonio), M3: (D: cloroformo/ P: sulfato de amonio 50 por ciento), M4: (D: solución A/P:solución B) y M5: (D: cloroformo/P: sulfato de amonio 30 por ciento). Se realizó evaluación inmunoquímica de la IgY anti- Giardia duodenalis mediante inmunodifusión, contrainmunoelectroforesis e inmunoelectrotransferencia ( Western blot); la pureza de IgY por SDS-PAGE en presencia y ausencia de reductor y la concentración de la inmunoglobulina (mg/mL) por espectrofotometría y densitometría. Resultados. La IgY anti- G. duodenalis mediante evaluación inmunoquímica presentó títulos hasta de 1:32. La inmunoglobulina en ausencia de reductor mostró una banda de 180 kd y en su presencia bandas de 30 y 68 kd, características de sus cadenas liviana y pesada, respectivamente. Las mayores concentraciones de inmunoglobulina se recuperaron con el método dos (M2), 4,6 mg de IgY por mL de yema de partida. Conclusiones. Por su facilidad y economía de producción en gallinas, los anticuerpos policlonales IgY anti- Giardia así obtenidos podrán utilizarse para desarrollar inmunoensayos que detecten el parásito en eluídos de heces

Comportamiento de la infección experimental por aislamientos colombianos de Giardia duodenalis en el modelo animal del gerbo (Meriones unguiculatus) / Experimental infection of the gerbil (Meriones unguiculatus) by Colombian isolates of Giardia duodenalis

Introducción. Se han informado infecciones naturales y experimentales con Giardia sp. en bovinos, equinos, caprinos, caninos, felinos y roedores como ratones, ratas y gerbos; estos últimos son el modelo más adecuado para estudios de la infección por Giardia duodenalis y Giardia muris.Objetivo. Establecer el comportamiento de la infección con aislamientos colombianos de Giardia duodenalis en el modelo animal del gerbo.ateriales y métodos. Se purificaron mediante gradientes de sacarosa y percoll quistes del parásito obtenidos a partir de heces de pacientes sintomáticos infectados. La inoculación a los animales se realizó mediante sonda gástrica con 5x103 quistes. El curso de la infección se estableció mediante recuento diario de quistes y semanal de trofozoítos durante treinta días. Resultados. La eliminación de quistes presentó un patrón intermitente de excreción, con ausencia en la primera y cuarta semanas de infección, y presencia constante durante la segunda y tercera semanas, en número variable con promedio mínimo de 79 y máximo de 17.943 quistes liberados en heces recolectadas en un período de dos horas. Se observó colonización de los trofozoítos en el intestino delgado, en número que osciló entre 15.000 y 6'577.778 trofozoítos por ml.Conclusiones. En gerbos infectados con aislamientos de Giardia duodenalis circulantes en otras regiones geográficas, la resolución natural de la infección oscila entre 86 y 114 días mientras que los gerbos infectados con aislamientos colombianos del parásito la resuelven al día 30. El gerbo constituye un modelo animal adecuado para la infección con aislamientos colombianos de G. duodenalis. La infección experimental por Giardia en gerbo permite obtener quistes y trofozoítos del parásito en cantidades suficientes con la finalidad de ser utilizados como antígenos para la inmunización de animales y para la obtención de anticuerpos que puedan utilizarse para la detección de antígeno de Giardia en materia fecal

Estandarización de la prueba de ELISA IgM en el diagnóstico de absceso hepático amebiano / IgM ELISA test standarization for amebic liver abscess diagnosis

Objetivo: estandarizar la técnica de ELISA IgM en el diagnóstico de absceso hepático amebiano. Diseño: estudio retrospectivo / propectivo, descriptivo, transversal, de tecnologías deiagnósticas para diferenciar etiología en absceso hepático. Lugar: pacientes de diferentes zonas del país. Población: se recolectaron tres grupos: primero, pacientes con absceso hepático amebiano, absceso hepático no amebiano o absceso hepático mixto; segundo, pacientes asintomáticos para amebiosis intestinal y extraintestinal; tercero, pacientes con hepatopatías diferentes. Mediciones: ELISA IgG, IgM, inmunodifusión y coprológico, se determinó el punto de corte para IgM y tablas de contingencia de análisis comparativo. Resultados: se recolectaron 81 casos entre sintomáticos y asintomáticos. Absceso hepático amebiano 34, promedio de edad 36; absceso hepático no amebiano 18; promedio de edad 45; absceso hepático mixto 4; asintomáticos 23, rango de edad 5 – 49 y otras hepatopatías 2 (absceso por Ascaris lumbricoides y ecografía hepática falsa positiva) con ELISA IgG e IgM (-). Punto de corte ELISA IgM (+) e¼ 0.511. Sintomáticos con absceso hepático amebiano y absceso hepático mixto ELISA IgG e IgM (+) 21 por ciento e IgG (+) pero IgM (-) 79 por ciento; absceso hepático no amebiano ELISA IgG e IgM (-) 100 por ciento. Pacientes asintomáticos con complejo Entamoeba histolytica / Entamoeba dispar y otros parásitos 100 por ciento (5/5) ELISA IgM (-) tanto los de ELISA IgG (+) 2 como IgG (-) 3 pacientes. Conclusiones: la prueba de ELISA IgG sigue siendo una herramienta diagnóstica para discernir etiología amebiana en absceso hepático. Se determinó el punto de corte par ELISA IgM con valor de e¼ 0.511 para el diagnóstico de absceso hepático amebiano con sensibilidad de 18 por ciento pero con especificidad de 100 por ciento y valor predictivo positivo de 100 por ciento

Identificación de antígenos de aislamientos colombianos de Giardia dudenalis reconocidos por IgG total y subclases / Antigen identification of Giardia duodenalis Colombian isolates recognized by total IgG and it subclasses

Se conocen investigaciones realizadas sobre la respuesta inmune humoral en giardiosis. Sin embargo, estudios sobre perfiles de antígenos de quistes y de trofozoítos de Giardia duodenalis reconocidos por IgG y subclases (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) anti-G. duodenalis no se han realizado en la misma magnitud. Con el fin de determinar los antígenos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis reconocidos por IgG y sus subclases anti-G. duodenalis, se utilizó la metodología de Western blot. Quistes y trofozoítos del parásito, independientemente, se sometieron a separación de proteínas mediante SDS-PAGE. Las proteínas separadas fueron transferidas a membrana de nitrocelulosa mediante inmunoelectrotransferencia y su antigenicidad determinada confrontando éstas con IgG y sus subclases anti-G. Duodenalis presentes en el suero de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamente. La unión antígeno-anticuerpo se detectó con conjugados anti-inmunoglobulina específicos unidos a fosfatasa alcalina, la cual permitió evidenciar los polipéptidos antigénicos cuando se adicionó el sustrato 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato/azul de nitrotetrazolio. Se leyeron y analizaron las bandas mediante análisis de regresión lineal, utilizando el programa Quantity One(c). Se reconocieron 32 antígenos, simultáneamente en quistes y trofozoítos de aislamientos colombianos del parásito por IgG total anti-G. duodenalis, que oscilaron entre 22-185 kDa y 19 en un rango de 42 a 180 kDa, reconocidos tanto por IgG1 como por IgG3 anti-G. duodenalis. Las IgG2 e IgG4 anti-parásito no reconocieron antígenos en ninguno de los dos estadios. Los antígenos de 27, 30, 31, 33, 45, 49, 57, 78, 89 y 170 kDa son compartidos con aislamientos de G. duodenalis circulantes en otras regiones geográficas. El reconocimiento de antígenos de quistes y trofozoítos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis por IgG, IgG1 e IgG3 anti-G. duodenalis de pacientes infectados sugiere que los antígenos del par sito originan respuesta inmune humoral en el hospedero.

Identificación de antígenos de quistes y trofozoitos de aislamientos colombianos de Giardia duodenalis reconocidos por IgA / Cyst and trophozoite antigen identification in Colombian Giardia duodenalis isolates recognized by IgA

Se conoce poco acerca del papel de la IgA en la respuesta inmune de la giardiosis. El propósito de este trabajo fue identificar los antígenos estimuladores de la producción de IgA anti-Giardia duodenalis de aislamientos colombianos del par sito. Se realizó separación de proteínas de quistes y trofozoítos mediante SDS-PAGE y su antigenicidad se determinó por electroinmunotransferencia. El perfil de proteínas de quistes mostró 24 proteínas en un rango de 23-270 kDa sin 2-mercaptoetanol (2-ME) y 35 polipéptidos en un rango de 22-241 kDa con 2-ME. Los trofozoítos revelaron 16 proteínas en un rango de 24-270 kDa sin 2-ME y 45 proteínas en un rango de 18-241 kDa con 2-ME. La identificación de 20 y 29 antígenos en quistes y trofozoítos de G. duodenalis, respectivamente, permite sugerir que los aislamientos colombianos de G. duodenalis pueden inducir una respuesta inmune humoral específica en el hospedero. Los antígenos de 31, 57, 110, 133 y 170 kDa reconocidos por IgA anti-Giardia simultáneamente en quistes y trofozoítos son compartidos con aislamientos de Giardia circulantes en otras regiones geográficas mientras que los de 35, 38, 43, 45, 49, 52, 60, 62, 65, 72, 82, 99, 145, 155 y 185 kDa son específicos de los aislamientos colombianos. Esto sugiere que los antígenos de 57, 65, 145 y 170 kDa, reconocidos por IgA anti-G. duodenalis en quistes (frecuencias entre 82 por ciento y 98 por ciento) y trofozoítos (frecuencias entre 86 por ciento y 97 por ciento), podrían ser los más indicativos de infección.

Evaluacion Clinica, imaginologia e inmunologia del absceso hepatico / Clinical, imaginological and immunological diagnostic of liver abcess

Introducción: Entamoeba histolytica es un parásito de distribución mundial. Se estima que el parásito infecta alrededor de 500 millones de personas anualmente y que de ellos 110.000 mueren por complicaciones causadas por. E. histolytica. Las personas infectadas por el parásito se pueden dividir en dos poblaciones diferentes de acuerdo a sus manifestaciones clínicas. En la primera son asintomáticos y está conformada por un 90 por ciento y en la segunda son los sintomáticos representada con un 10 por ciento que manifiestan la enfermedad principalmente como disentería amebiana y como amebiasis extra-intestinal. Objetivo: establecer la capacidad discriminatoria de la clínica, de laboratorio e imagenología en la etiología del absceso hepático. Metodología: estudio prospectivo, descriptivo, abierto, de evaluación clínica y de tecnologías diagnósticas para diferenciar etiología. Resultados: se evaluaron 61 pacientes (durante 46 meses), y se excluyeron 12. Se encontraron 29 casos de AHA (59 por ciento), 16 casos de AHNA (33 por ciento) y 4 mixtos (8 por ciento). Promedio de edad para AHA fue 36 y 45 para AHNA, la relación hombre.-mujer fue 24/5 y 11/5 respectivamente. No se diferencia la etiología por cuadro clínico, examen físico, imagenología o laboratorios (CH, VSG, función hepática) excepto por la mayor prolongación del PT en caso de AHNA. En caso de AHA las pruebas de ELISA fueron positivas en 100 por ciento, las de 10 en 93 por ciento y en el Inmunoblot el orden de frecuencia de las bandas fue: 38 kDa (93 por ciento), 42 kDa (90 por ciento), 80 kDa (86 por ciento), 116 kDa (76 por ciento), 50 kDa (24 por ciento), 97 kDa (17 por ciento), 22.5 kDa (14 por ciento), 45 kDa (10 por ciento), 31 kDa (3 por ciento). Las pruebas de ELISA e ID fueron positivas en todos los pacientes con absceso hepático mixto y en el Inmunoblot el orden de frecuencia de las bandas fue: 80 y 38 kDa (100 por ciento), 42 kDa (75 por ciento), 11 kDa (50 por ciento), 50 y 22.5 kDa (25 por ciento)...

Liver abscess caused by Ascaris lumbricoides: case report

A case is reported of a woman who lived in a rural area with a chronic illness that consisted of weight loss and abdominal pain in the epigastrium and upper right quadrant. The initial diagnosis was a mass in the liver, which was later, demonstrated, both by direct and histological examination, to be an abscess caused by Ascaris lumbricoides. Eggs of Ascaris lumbricoides and abundant Charcot-Leyden Crystals were found

Serodiagnóstico de giardiosis: identificación de inmunoglobulina G anti-Giardia duodenalis en suero mediante ELISA / Serodiagnosis of giardiasis: identification of immnunoglobulin G anti-Giardia duodenal in sera by ELISA

El diagnóstico de la infección por Giardia duodenalis se basa en la identificación de quistes o trofozoítos en materia fecal, alcanzado una sensibilidad máxima de 85 por ciento en muestras seriadas, debido a la excreción intermitente de quistes. Aunque la determinación de anticuerpos no permite diferenciar entre una infección pasada y una reciente, sí podría ayudar en el diagnóstico diferencial. El presente estudio tuvo como objetivo estandarizar y evaluar una prueba inmunoenzimática (ELISA) para la detección de anticuerpos tipo IgG anti-Giardia duodenalis en sueros de pacientes con la infección. La preparación del antígeno se hizo a partir de trofozoitos cultivados que, inicialmente, fueron obtenidos del intestino de gerbils (Meriones unguiculatus) infectados experimentalmente con quistes purificados a partir de muestras positivas de materia fecal humana. Para la estandarización y evaluación de la prueba, se emplearon 60 sueros de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamnte ( muestra positivas) y 47 sueros de cordon umbilical recién cortado (muestras negativas). Como conjugado, se utilizó anti-IgG humana ligada a osfatasa alcalina. La concentración óptima de antígeno de trofozoito de G. duodenalis fue de 15µg/ml y las diluciones óptimas de suero y conjugado fueron de 1:25 y 1:400, respectivamente. El valor del punto de corte (absorbancia) fue 0,300. Los parámetros de la prueba fueron: sensibilidad, 98,3 por ciento (intevalo de confianza de 95 por ciento (IC 95 por ciento): 89,9 por ciento - 99,9 por ciento); especificidad, 95,7 por ciento (IC 95 por ciento: 84,3 por ciento - 99,3 por ciento); valor predictivo positivo, 96,7 por ciento (IC 95 por ciento: 87,6 por ciento - 99,4 por ciento), y el valor predictivo negativo, 97, 8 por ciento (IC 95 por ciento: 87,0 por ciento - 99,9 por ciento). La prueba de ELISA descrita contribuirá a mejorar el diagnóstico de giardiosis y podrá ser empleada para estudios epidemiológicos de seroprevalencia

Inmunodiagnóstico de la infección chagásica por Elisa / Immunodiagnosis of chagas' diseases by Elisa

La demostración del agente infeccioso es la regla de oro en las parasitosis, pero, esto no siempre es factible. Por ello, en la infección chagásica se recurre a la detección de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi siendo las pruebas serodiagnósticas de gran utilidad. El presente estudio estandarizó y evaluó la prueba inmunoenzimática Elisa para el inmunodiagnóstico de la infección chagásica. Se confrontaron 595 muestras de suero de pacientes provenientes de Guateque, Boyacá, zona endémica de la enfermedad de chagas, con epimastigotes de T. cruzi de la cepa colombiana IRHO/CO/69/Guateque utilizando las pruebas inmunodiagnósticas de inmunofluorescencia indirecta (IFI), prueba de referencia, y el ensayo inmunoenzimático Elisa. El análisis de la validez de ésta se realizó mediante el cálculo del área bajo la curva del operador recptor (ROC) como medida de la exactitud (validez). Las condiciones óptimas de la prueba Elisa fueron: antígeno 0.75 µg/ml y dilución de la muestra 1:1.000. El ensayo del estudio según los puntos de corte 0,2, 0,3, 0,4 y 0,5 ofrece una sensibilidad de 0,99, 0,99, 0,98 y 0,93 y una especificidad de 0,94, 0,96, 0,98 y 0,98, respectivamente. El Elisa del estudio se muestra como una prueba válida no sólo por la sensibilidad y especificidad sino porque el análisis del área bajo la curva ROC fue de 0,9952 que es muy cercano al ideal. La prueba de Elisa es superior a la de IFI para la detección de anticuerpos contra T. cruzi y podría ser utilizada en estudios seroepidemiológicos en zonas de alta y moderada prevalencia

Inmunodiagnóstico de la infección en humanos por Trypanosoma cruzi mediante Elisa utilizando sangre recolectada en papel de filtro / Immunodiagnosis of Trypanosoma cruzi infección in humans using Elisa on blood collected on filter paper

Los estudios seroepidemiológicos para la detección de anticuerpos contra Trypanosoma cruzi requieren de un gran número de muestras y la obtención de sangre por punción venosa y su transporte se hacen difíciles y costosos. La recolección de sangre en papel de filtro minimiza éstas dificultades y el estudio valoró tanto éste sistema como la validez y reproducibilidad del inmunoensayo Elisa para el inmunodiagnóstico de la infección en humanos por T. cruzi. Se utilizó suero y eluídos de sangre recolectada en papel de filtro de personas de zona endémica de enfermedad de chagas para la detección de anticuerpos contra T. cruzi mediante las pruebas de inmunofluorescencia indirecta (IFI) y Elisa. La validez del Elisa utilizando eluídos de sangre en papel de filtro presentó un área bajo la curva de receptor operador (ROC) de 0.9944. El acuerdo del Elisa entre los dos tipos de muestra presentó una distribución cercana a la normal con un promedio de -0.01 y una desviación estándar de 0.23. Se evidenció que la reproducibilidad del IFI es inferior a la del Elisa. Esta mayor concordancia y la mayor sensibilidad y especificidad encontrada previamente para el Elisa hacen pensar en la posibilidad de presentarla como alternativa de prueba de referencia para la detección de anticuerpos contra T. cruzi y su utilización en estudios epidemiológicos

Exactitud del elisa para el diagnóstico de fascioliasis bovina: análisis del área bajo la curva del receptor operador (ROC) / Elisa test evaluation for diagnosis of bovine fascioliasis: receiver operator curve (ROC) analysis

Se estandarizó y evaluó la prueba de Elisa para el serodiagnóstico de la fascioliasis bovina empleando tres antígenos diferentes de Fasciola hepatica: somático crudo (AgS) y metabólicos, excretor-secretor total (AgE/S-T) y excretor-secretor parcialmente purificado (AgE/S-PP). Se recolectaron treinta muestras de suero de bovinos infectados naturalmente con F. hepatica y parasitológicamente comprobados, sacrificados en mataderos. Estos provenían de regiones de Colombia consideradas zonas endémicas, que se encuentran por encima de los 1.800 metros msnm, y 45 sueros de bovinos de edad y manutención conocida desde el nacimiento hasta su sangría, los cuales vivían en zonas no endémicas de F. hepatica y que fueron consideradas como muestras negativas. Se utilizó el análisis del área bajo la curva del receptor operador (ROC) siguiendo el método de integración trapezoidal para establecer la exactitud del Elisa y discriminar ejemplares parasitados de los anos. Los tres antígenos de F. hepatica, (AgS), (AgE/S-T) y (AgE/S PP), debido a su gran capacidad discriminatoria entre bovinos sanos de los infectados, pueden utilizarse en el serodiagnóstico de fascioliasis bovina

Estandarización y evaluación de Elisa en eluidos de sangre seca recolectada en papel de filtro para el diagnóstico de cisticercosis / Standarization and evaluation of Elisa in eluates of dried blood collected on filter paper for cysticercosis diagnosis

Se estandarizó y evaluó la prueba inmunoenzimática Elisa para la detección de anticuerpos contra larva de Taenia solium usando eluidos de sangre seca obtenida por punción digital y recolectada en papel de filtro. La dilución óptima de muesta fue de 1:400, la cual es equivalente a la obtenida a partir de suero. El Elisa mostró una sensibilidad de 100 por ciento y una especificidad de 97 por ciento, lo cual permite su utilización tanto para diagnóstico como para encuestas seroepidemiológicas

Estandarización y evaluación de elisa para el serodiagnóstico de la leishmaniasis: I. Leishmaniasis cutánea / Standardization and ELISA test evaluation in the serodiagnosis of leishmaniasis. I. Cutaneous leishmaniasis

Se evaluó la prueba inmunoenzimática elisa para la detección de anticuerpos en pacientes con leishmaniasis cutánea, usando como conjugado anti-IgG humana con fosfatasa alcalina. La concentración óptima de antígeno, extracto de promastigotes de leishmania, fue 5 µg/mL y las diluciones óptimas de los sueros tanto reactivos como no reactivos y de conjugado fueron 1:400 y 1:10.000, respectivamente. Se analizaron 163 sueros de pacientes que no habían estado en contacto con el parásito (Leishmania), 31 sueros de pacientes con leishmaniasis cutánea comprabada parasitológicamente y 39 sueros de pacientes con enfermedad de Chagas comprobada serológicamente. Con valores de densidad óptica iguales o mayores de 0,502 la prueba mostró una especificidad del 94,6 por ciento y una sensibilidad del 58,1 por ciento debido a que los sueros de las personas con enfermedad de Chagas mostraron franca reacción cruzada con el antígeno de Leishmania. Sin embargo, el elisa con un punto de corte de 0,314, dado únicamente por los sueros de personas que no habían estado en contacto con el parásito, arroja una sensibilidad y especificidad del 83,9 por ciento y 83,2 por ciento, respectivamente. Los resultados del estudio sugieren que el elisa puede utilizarse en áreas donde la enfermedad de Chagas no sea endémica y las cuales están bien delimitadas en Colombia

Standardization and evaluation of ELISA for the serodiagnosis of amoebic liver abscess

An ELISA test for the serological diagnosisof amoebic liver abscess (ALA) was standardized and evaluated in sera from three groups of patients: (1) three patients with diagnosis confirmed by isolation of the parasite,(2) thirty seven patients with diagnosis established by clinical findings and ultrasound studies and (3) seven patients whose diagnosis were established by clinical findings and a positive double immunodifusion test. Ninety one serum samples from healthy subjects and 22 from patients with other liver or parasitic diseases were also included in the study. the optimum concentration of Entamoeba histolytica antigen was 1.25 µg/ml and optimum dilutions of serum and anti-human IgG-alkaline phosphatase conjugate were 1:400 and 1:4000 respectively. The cut-off point of the ELISA test in this study was an absorbance value of 0.34. The test parameters were: sensitivity = 95.7 per cent, specificty = 100 per cent, positive predictive value = 100 per cent and negative predictive value = 98.2 per cent.The ELISA test was found to be of great use as a diagnostic tool for the establishment of amoebic etiology in patients with clinical supposition of ALA. The test could also be used for seroepidemiological surveys of the prevalence of invasive amoebiasis in a given population, since it allows the processing of a greater number of samples at a lower cost tahn other serological tests